一般來說,細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)移,最佳的方法是進(jìn)行低溫保存(-70℃~-196℃),而細(xì)胞進(jìn)行低溫保存的基本原理是:在-70℃以下時(shí),細(xì)胞內(nèi)的酶活性均已停止,即代謝處于停止?fàn)顟B(tài),故而可以長期保存。
細(xì)胞低溫保存的關(guān)鍵在于0~20℃階段的處理過程,因?yàn)樵诖藴囟确秶鷥?nèi),冰晶呈針狀,極易招致細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。
所以復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化,避免緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損傷。
1)所需材料
· 含有細(xì)胞的凍存管;
· 37℃水浴鍋;
· 37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)基;
2)細(xì)胞的復(fù)蘇流程
1.佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出冷凍管;
2.迅速放入37℃水浴中,并不時(shí)搖動(dòng),在1分鐘內(nèi)使其融化,然后在無菌下取出細(xì)胞;
3.在150g速度下離心5~10分鐘,棄去上層液;
4.加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度1×10 9 cell/L,置37℃恒溫箱靜置培養(yǎng);
5.次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長情況;
6.若細(xì)胞密度較高,及時(shí)傳代。
3)注意事項(xiàng)
在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí),應(yīng)注意融化凍存細(xì)胞速度要快,要不時(shí)搖動(dòng)冷凍管,使之盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細(xì)胞存活率高,生長及形態(tài)良好。
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